核心目標(biāo)： 將熔化的、溫度適宜的、無(wú)菌的瓊脂培養(yǎng)基，在無(wú)菌條件下，均勻倒入無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，冷卻凝固后形成可用于接種微生物的平板。

1. 準(zhǔn)備階段：

培養(yǎng)基滅菌與保溫：

準(zhǔn)確稱(chēng)量配制培養(yǎng)基，充分溶解（避免結(jié)塊）。

正確滅菌（通常121°C, 15-20分鐘高壓蒸汽滅菌）。確保滅菌徹底！

溫度控制（至關(guān)重要！）： 滅菌后，將熔化的培養(yǎng)基置于恒溫水浴鍋中保溫。溫度通常控制在45-50°C之間（手背觸碰容器壁感覺(jué)溫?zé)岬�不燙手）。

溫度過(guò)高（>55°C）： 倒板時(shí)產(chǎn)生大量蒸汽，冷凝水過(guò)多；可能燙死部分已加入的微生物（如果倒含菌平板）；瓊脂凝固慢，不易鋪勻。

溫度過(guò)低（<45°C）： 培養(yǎng)基開(kāi)始凝固，倒入皿中會(huì)結(jié)塊、不平整、厚度不均。

培養(yǎng)皿準(zhǔn)備：

使用無(wú)菌、干燥、潔凈的培養(yǎng)皿。新拆封或經(jīng)干熱/濕熱滅菌的均可。

將培養(yǎng)皿疊放在工作臺(tái)面上，方便快速拿取。

工作臺(tái)消毒：

徹底清潔并用70-75%酒精擦拭超凈工作臺(tái)或生物安全柜臺(tái)面。開(kāi)啟紫外燈照射至少20-30分鐘（關(guān)閉后通風(fēng)幾分鐘再開(kāi)始操作）。

操作前用酒精棉球擦拭雙手。

物品擺放：

將保溫的培養(yǎng)基容器、疊放的培養(yǎng)皿、酒精燈、打火機(jī)、記號(hào)筆等有序放在超凈臺(tái)內(nèi)易取用的位置。避免手臂頻繁跨越無(wú)菌物品上方。

2. 倒平板操作（無(wú)菌操作！）：

點(diǎn)燃酒精燈： 在靠近工作區(qū)域中心位置點(diǎn)燃酒精燈，創(chuàng)造無(wú)菌區(qū)（火焰周?chē)鷼饬魃仙�，減少塵埃下落）。

拿取培養(yǎng)皿：

用一只手（通常是左手）平穩(wěn)、快速地拿起最上面一個(gè)培養(yǎng)皿的底部（不要碰內(nèi)表面）。

在酒精燈火焰附近，用另一只手（右手）輕輕掀開(kāi)皿蓋一條縫隙（約45度角，不要完全打開(kāi)！），大小剛好能倒入培養(yǎng)基。保持皿蓋在皿底上方，遮擋灰塵和微生物。

傾倒培養(yǎng)基：

右手拿起裝有培養(yǎng)基的三角瓶或試管（再次在火焰上快速過(guò)一下瓶口/管口滅菌）。

在酒精燈火焰附近，將培養(yǎng)基瓶口/管口迅速通過(guò)火焰，然后立即從掀開(kāi)的縫隙中將培養(yǎng)基平穩(wěn)、勻速地倒入培養(yǎng)皿中。

倒入量： 通常90mm直徑培養(yǎng)皿倒入約15-20ml培養(yǎng)基（約占皿高度的1/3到1/2）。目標(biāo)是凝固后厚度約3-4mm。太少易干裂，太厚可能影響菌落形態(tài)觀察和分離效果。

傾倒技巧： 不要直接倒在皿底中心，可以從邊緣開(kāi)始緩慢旋轉(zhuǎn)倒入，或沿皿壁緩緩注入。避免產(chǎn)生氣泡。

覆蓋皿蓋與旋轉(zhuǎn)搖晃：

倒入適量培養(yǎng)基后，迅速將掀開(kāi)的皿蓋蓋回原位（整個(gè)過(guò)程盡量快，減少暴露時(shí)間）。

立即用雙手（隔著皿蓋和皿底）拿起培養(yǎng)皿，在臺(tái)面上做水平“8”字或同心圓旋轉(zhuǎn)搖晃，使熔化的培養(yǎng)基均勻鋪滿(mǎn)整個(gè)皿底。動(dòng)作要輕柔平穩(wěn)，避免培養(yǎng)基濺到皿蓋或溢出。

靜置： 將平板水平放置在干凈、平整、無(wú)震動(dòng)的臺(tái)面上，讓其自然冷卻凝固。不要堆疊！

3. 冷卻凝固：

讓平板在室溫下（或超凈臺(tái)內(nèi)）完全凝固（通常需要20-30分鐘，視環(huán)境溫度而定）。觸摸皿底感覺(jué)不溫即可。

減少冷凝水：

斜置法（推薦）： 凝固約10-15分鐘（培養(yǎng)基已基本凝固但中心可能還有點(diǎn)軟）后，將平板倒置（皿蓋在下，皿底在上），然后疊放（不超過(guò)6個(gè)）。這樣冷凝水會(huì)聚集在皿蓋內(nèi)，不會(huì)滴落到培養(yǎng)基表面破壞菌落。

正置法： 如果平板需立即使用（如倒含菌平板），可正置凝固，但使用前需在培養(yǎng)箱中倒置一段時(shí)間讓冷凝水被皿蓋吸收或蒸發(fā)。冷凝水過(guò)多會(huì)影響菌落生長(zhǎng)和分離。

4. 質(zhì)量檢查與儲(chǔ)存：

外觀檢查： 凝固后檢查平板：

是否平整？ 表面光滑無(wú)波紋。

厚度是否均勻？ 邊緣和中心厚度一致。

有無(wú)氣泡？ 表面或內(nèi)部應(yīng)無(wú)氣泡。

有無(wú)污染？ 表面應(yīng)潔凈無(wú)雜菌斑點(diǎn)（尤其邊緣）。

有無(wú)裂紋？ 培養(yǎng)基應(yīng)完整無(wú)裂痕。

無(wú)菌檢測(cè)： 隨機(jī)抽取部分平板（或每批次），在培養(yǎng)溫度下（如30°C或37°C）倒置培養(yǎng)24-48小時(shí)，檢查是否有雜菌生長(zhǎng)。這是驗(yàn)證無(wú)菌操作和培養(yǎng)基無(wú)菌性的關(guān)鍵步驟。

標(biāo)記： 在平板底部邊緣（不要寫(xiě)在皿蓋上！）清晰標(biāo)記培養(yǎng)基名稱(chēng)、日期、操作者等信息。

儲(chǔ)存： 合格的平板可倒置于4°C冰箱保存（塑料袋包裹防干）。保存時(shí)間依培養(yǎng)基類(lèi)型而定（通常1-4周），使用前檢查是否有污染、干裂或變質(zhì)。

無(wú)菌！無(wú)菌！無(wú)菌！ 這是核心。每一步都要有嚴(yán)格的無(wú)菌意識(shí)（環(huán)境、物品、操作）。

溫度！溫度！溫度！ 培養(yǎng)基保溫在45-50°C是獲得平整平板的關(guān)鍵。

動(dòng)作要快而穩(wěn)： 掀蓋、倒液、蓋蓋、搖晃都要迅速，減少暴露時(shí)間。但傾倒和搖晃要平穩(wěn)，避免產(chǎn)生氣泡和飛濺。

培養(yǎng)皿蓋不要完全打開(kāi)！ 始終保持皿蓋遮擋。

充分利用酒精燈火焰區(qū)域： 關(guān)鍵操作（開(kāi)蓋、倒液）都在火焰附近的無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行。

旋轉(zhuǎn)搖晃要均勻輕柔： 確保厚度均勻，無(wú)氣泡。

冷卻凝固要水平放置： 避免平板傾斜導(dǎo)致厚度不均。

倒置儲(chǔ)存減少冷凝水： 這對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)（劃線(xiàn)、涂布、培養(yǎng)觀察）非常重要。

做好標(biāo)記和質(zhì)量控制： 無(wú)菌檢測(cè)必不可少。

如果需要將特定微生物直接混入培養(yǎng)基中倒板（如菌落計(jì)數(shù)、抗生素敏感試驗(yàn)等），操作流程基本一致，關(guān)鍵區(qū)別在于：

混菌步驟： 在保溫的培養(yǎng)基冷卻到合適溫度（45-50°C）后，在無(wú)菌條件下，將適量稀釋好的菌液迅速、輕柔地加入培養(yǎng)基中（通常加到三角瓶里），充分混勻（可溫和旋搖三角瓶，避免產(chǎn)生氣泡），然后立即倒入平板。

動(dòng)作更要迅速： 防止菌液在溫?zé)崤囵B(yǎng)基中停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響活力。

避免高溫： 嚴(yán)格確保培養(yǎng)基溫度不高于50°C，否則會(huì)殺死微生物。

倒板、搖晃、凝固步驟相同，但通常需要正置冷卻凝固，避免菌液隨冷凝水流淌。凝固后盡快倒置培養(yǎng)。

做好倒平板是微生物實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)。熟能生巧，多加練習(xí)，并時(shí)刻牢記無(wú)菌、溫度、速度、均勻這四個(gè)要點(diǎn)，你一定能倒出漂亮、合格的平板！