1.營(yíng)養(yǎng)成分

1）通常在培養(yǎng)基中加入磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，以補(bǔ)充磷、鉀、硫、鎂元素，如果同時(shí)加入鈣鹽和（亞）鐵鹽，它們用量要適當(dāng)加大，主要是考慮它們之間會(huì)發(fā)生反應(yīng)形成不溶性的磷酸鹽或氫氧化物，影響微生物的利用。蛋白胨、酵母膏和其他生物制品中都含有磷酸鹽，若培養(yǎng)基中有Mg2+和Ca2+等離子，就會(huì)出現(xiàn)沉淀、渾濁。為避免生成沉淀，可將鹽配成溶液，分開滅菌后再加入培養(yǎng)基。

2）有些糖類或營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如葡萄糖、維生素等在高溫高壓下會(huì)被破壞，故應(yīng)降低壓力、溫度或縮短滅菌時(shí)間，或用過濾或其他方法除菌。

3）除培養(yǎng)固氮菌外，在培養(yǎng)基中需加入無機(jī)氮源或有機(jī)氮源。許多細(xì)菌不能利用硝酸鹽、宜用銨鹽作為無機(jī)氮源；真菌大多可利用銨鹽，也可利用硝酸鹽。細(xì)菌雖能利用無機(jī)氮，但不如利用有機(jī)氮普遍，常用的有機(jī)氮源有蛋白胨、牛肉膏和水解酪蛋白等。

4）配制培養(yǎng)基時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度應(yīng)適當(dāng)，太低不能滿足生長(zhǎng)需求，偏高會(huì)使菌體瘋長(zhǎng)，過高還會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)。所以配制培養(yǎng)基應(yīng)按規(guī)定的濃度配制。

2.pH值

微生物要求培養(yǎng)基有適宜的pH值，但它們的代謝作用又會(huì)改變培養(yǎng)基pH。所以在配制培養(yǎng)基時(shí)，不僅培養(yǎng)基的起始pH值應(yīng)符合微生物的要求，還要考慮采用何種緩沖作用保持其pH。一般在培養(yǎng)產(chǎn)酸的微生物時(shí)可在培養(yǎng)基中加入適量碳酸鈣，以中和不斷產(chǎn)生的酸。在合成培養(yǎng)基中，組成成分中含有磷酸鹽者一般都已設(shè)計(jì)好pH值，故不需要再專門調(diào)pH值。若pH值降到4.5以下，瓊脂固體培養(yǎng)基滅菌后將不再凝固，或凝固不堅(jiān)，可將相關(guān)成分分別滅菌后再混合較好。

3.滅菌

一般培養(yǎng)基均采用濕熱高溫高壓滅菌，滅菌后培養(yǎng)基顏色若變褐色或褐色加深，主要原因是還原糖類與蛋白質(zhì)和氨基酸在高溫高壓下發(fā)生了美拉德反應(yīng)。這種褐色物質(zhì)會(huì)抑制微生物的生長(zhǎng)，應(yīng)盡量防止�？s短高溫滅菌時(shí)間，或?qū)⑻桥c含氮化合物分開滅菌，可防止這種反應(yīng)。

4. 培養(yǎng)基的物理狀態(tài)

含瓊脂培養(yǎng)基，若滅菌前未進(jìn)行加熱溶解，滅菌后需充分搖勻使用。瓊脂培養(yǎng)基不可反復(fù)熔化使用；待用的瓊脂培養(yǎng)基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫，一般不可超過4小時(shí)。若培養(yǎng)基中含有較多不溶性物質(zhì)，如黃豆餅粉，要盡量分裝均勻，在滅菌時(shí)要盡量防止培養(yǎng)基噴出來，可在滅菌結(jié)束后等會(huì)再開壓力鍋或減少每瓶裝量。

總之，在配制培養(yǎng)基時(shí)我們既要考慮培養(yǎng)基組成成分，也要考慮培養(yǎng)基物理狀態(tài)、pH值和滅菌效果等。另外水的純度也很重要，一般天然水中含有較多的礦物鹽離子，會(huì)影響培養(yǎng)基中常量和微量元素，進(jìn)而影響微生物的生長(zhǎng)繁殖。