核心目標： 將熔化的、溫度適宜的、無菌的瓊脂培養基，在無菌條件下，均勻倒入無菌的培養皿中，冷卻凝固后形成可用于接種微生物的平板。

1.準備階段：

培養基滅菌與保溫：

準確稱量配制培養基，充分溶解（避免結塊）。

正確滅菌（通常121℃, 15-20分鐘高壓蒸汽滅菌）。確保滅菌徹底！

溫度控制（至關重要�。�： 滅菌后，將熔化的培養基置于恒溫水浴鍋中保溫。溫度通�？刂圃�45-50℃之間（手背觸碰容器壁感覺溫熱但不燙手）。

溫度過高（＞55℃）： 倒板時產生大量蒸汽，冷凝水過多；可能燙死部分已加入的微生物（如果倒含菌平板）；瓊脂凝固慢，不易鋪勻。

溫度過低（＜45℃）： 培養基開始凝固，倒入皿中會結塊、不平整、厚度不均。

培養皿準備：

使用無菌、干燥、潔凈的培養皿。新拆封或經干熱/濕熱滅菌的均可。

將培養皿疊放在工作臺面上，方便快速拿取。

工作臺消毒：

徹底清潔并用70-75%酒精擦拭超凈工作臺或生物安全柜臺面。開啟紫外燈照射至少20-30分鐘（關閉后通風幾分鐘再開始操作）。

操作前用酒精棉球擦拭雙手。

物品擺放：

將保溫的培養基容器、疊放的培養皿、酒精燈、打火機、記號筆等有序放在超凈臺內易取用的位置。避免手臂頻繁跨越無菌物品上方。

2.倒平板操作（無菌操作�。�：

點燃酒精燈： 在靠近工作區域中心位置點燃酒精燈，創造無菌區（火焰周圍氣流上升，減少塵埃下落）。

拿取培養皿：

用一只手（通常是左手）平穩、快速地拿起最上面一個培養皿的底部（不要碰內表面）。

在酒精燈火焰附近，用另一只手（右手）輕輕掀開皿蓋一條縫隙（約45度角，不要完全打開！），大小剛好能倒入培養基。保持皿蓋在皿底上方，遮擋灰塵和微生物。

傾倒培養基：

右手拿起裝有培養基的三角瓶或試管（再次在火焰上快速過一下瓶口/管口滅菌）。

在酒精燈火焰附近，將培養基瓶口/管口迅速通過火焰，然后立即從掀開的縫隙中將培養基平穩、勻速地倒入培養皿中。

倒入量： 通常90mm直徑培養皿倒入約15-20ml培養基（約占皿高度的1/3到1/2）。目標是凝固后厚度約3-4mm。太少易干裂，太厚可能影響菌落形態觀察和分離效果。

傾倒技巧： 不要直接倒在皿底中心，可以從邊緣開始緩慢旋轉倒入，或沿皿壁緩緩注入。避免產生氣泡。

覆蓋皿蓋與旋轉搖晃：

倒入適量培養基后，迅速將掀開的皿蓋蓋回原位（整個過程盡量快，減少暴露時間）。

立即用雙手（隔著皿蓋和皿底）拿起培養皿，在臺面上做水平“8”字或同心圓旋轉搖晃，使熔化的培養基均勻鋪滿整個皿底。動作要輕柔平穩，避免培養基濺到皿蓋或溢出。

靜置： 將平板水平放置在干凈、平整、無震動的臺面上，讓其自然冷卻凝固。不要堆疊！

3.冷卻凝固：

讓平板在室溫下（或超凈臺內）完全凝固（通常需要20-30分鐘，視環境溫度而定）。觸摸皿底感覺不溫即可。

減少冷凝水：

斜置法（推薦）： 凝固約10-15分鐘（培養基已基本凝固但中心可能還有點軟）后，將平板倒置（皿蓋在下，皿底在上），然后疊放（不超過6個）。這樣冷凝水會聚集在皿蓋內，不會滴落到培養基表面破壞菌落。

正置法： 如果平板需立即使用（如倒含菌平板），可正置凝固，但使用前需在培養箱中倒置一段時間讓冷凝水被皿蓋吸收或蒸發。冷凝水過多會影響菌落生長和分離。

4.質量檢查與儲存：

外觀檢查： 凝固后檢查平板：

是否平整？ 表面光滑無波紋。

厚度是否均勻？ 邊緣和中心厚度一致。

有無氣泡？ 表面或內部應無氣泡。

有無污染？ 表面應潔凈無雜菌斑點（尤其邊緣）。

有無裂紋？ 培養基應完整無裂痕。

無菌檢測： 隨機抽取部分平板（或每批次），在培養溫度下（如30℃或37℃）倒置培養24-48小時，檢查是否有雜菌生長。這是驗證無菌操作和培養基無菌性的關鍵步驟。

標記： 在平板底部邊緣（不要寫在皿蓋上�。┣逦鷺擞浥囵B基名稱、日期、操作者等信息。

儲存： 合格的平板可倒置于4℃冰箱保存（塑料袋包裹防干）。保存時間依培養基類型而定（通常1-4周），使用前檢查是否有污染、干裂或變質。

無菌！無菌！無菌！ 這是核心。每一步都要有嚴格的無菌意識（環境、物品、操作）。

溫度！溫度！溫度！ 培養基保溫在45-50℃是獲得平整平板的關鍵。

動作要快而穩： 掀蓋、倒液、蓋蓋、搖晃都要迅速，減少暴露時間。但傾倒和搖晃要平穩，避免產生氣泡和飛濺。

培養皿蓋不要完全打開！ 始終保持皿蓋遮擋。

充分利用酒精燈火焰區域： 關鍵操作（開蓋、倒液）都在火焰附近的無菌區域進行。

旋轉搖晃要均勻輕柔： 確保厚度均勻，無氣泡。

冷卻凝固要水平放置： 避免平板傾斜導致厚度不均。

倒置儲存減少冷凝水： 這對后續實驗（劃線、涂布、培養觀察）非常重要。

做好標記和質量控制： 無菌檢測必不可少。

如果需要將特定微生物直接混入培養基中倒板（如菌落計數、抗生素敏感試驗等），操作流程基本一致，關鍵區別在于：

混菌步驟： 在保溫的培養基冷卻到合適溫度（45-50℃）后，在無菌條件下，將適量稀釋好的菌液迅速、輕柔地加入培養基中（通常加到三角瓶里），充分混勻（可溫和旋搖三角瓶，避免產生氣泡），然后立即倒入平板。

動作更要迅速： 防止菌液在溫熱培養基中停留時間過長影響活力。

避免高溫： 嚴格確保培養基溫度不高于50℃，否則會殺死微生物。

倒板、搖晃、凝固步驟相同，但通常需要正置冷卻凝固，避免菌液隨冷凝水流淌。凝固后盡快倒置培養。

做好倒平板是微生物實驗成功的基礎。熟能生巧，多加練習，并時刻牢記無菌、溫度、速度、均勻這四個要點！