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微生物檢測中 “稀釋液” 如何選擇

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2025-08-22  來源:網(wǎng)絡(luò)
核心提示: 在微生物檢測中,樣品稀釋是獲取準(zhǔn)確結(jié)果的基礎(chǔ)步驟。稀釋液的選擇直接影響微生物的存活、分散和計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。生理鹽水(0.
 在微生物檢測中,樣品稀釋是獲取準(zhǔn)確結(jié)果的基礎(chǔ)步驟。稀釋液的選擇直接影響微生物的存活、分散和計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。生理鹽水(0.85% NaCl)、磷酸鹽緩沖液(PBS)和含保護(hù)成分的緩沖液(如緩沖蛋白胨水)是三種常用選擇,它們的特性和適用場景大不相同。


核心差異:成分決定功能

1.生理鹽水 (0.85% NaCl)

優(yōu)點(diǎn):成分極簡(僅氯化鈉)、成本低、易配制、提供基本滲透壓保護(hù)。

致命缺點(diǎn)無緩沖能力。稀釋酸性(如果汁)、堿性或含緩沖物質(zhì)(如土壤、食品)樣品時,pH值劇烈波動,極易殺死對pH敏感的微生物(多數(shù)細(xì)菌在pH<5或>9時嚴(yán)重受抑)。

適用場景:僅推薦用于pH接近中性、無抑制劑、滲透壓正常的簡單樣品(如部分臨床尿液、分泌物常規(guī)計(jì)數(shù))。不推薦作為食品、環(huán)境等復(fù)雜樣品的通用稀釋液。


2.磷酸鹽緩沖液 (PBS)

優(yōu)點(diǎn)

緩沖能力:核心優(yōu)勢。磷酸鹽緩沖對(pH 7.2-7.4)能有效抵抗稀釋帶來的pH變化,顯著提高微生物(尤其革蘭氏陰性菌)存活率。

提供等滲環(huán)境(含NaCl)。

配制較簡單,成本適中。

缺點(diǎn):緩沖能力在中性附近最佳,對極強(qiáng)酸/堿樣品(pH<4.5或>8.5)可能不足;不含營養(yǎng)或保護(hù)劑,無法中和消毒劑等抑制劑。

適用場景是最常用、推薦的通用稀釋液。 廣泛適用于:

食品(菌落總數(shù)、大腸菌群)

水質(zhì)(總大腸菌群)

環(huán)境樣品(土壤、空氣沉降物初步稀釋)

常規(guī)臨床樣本(非血液)

任何需要穩(wěn)定pH的微生物稀釋操作。


3.含保護(hù)成分的緩沖液 (如緩沖蛋白胨水-BPW, 0.1%蛋白胨水, 含中和劑緩沖液)

優(yōu)點(diǎn)綜合保護(hù)能力最強(qiáng)

緩沖基礎(chǔ):維持pH穩(wěn)定。

營養(yǎng)支持 (如蛋白胨):為受損細(xì)胞提供能量修復(fù),延長存活,促進(jìn)復(fù)蘇,減少假陰性。

保護(hù)/中和:添加物可中和消毒劑(如卵磷脂-吐溫80中和季銨鹽)、螯合重金屬、或添加表面活性劑(如吐溫80)幫助分散菌團(tuán)。

缺點(diǎn):成分復(fù)雜,配制繁瑣,成本高;含營養(yǎng)可能致微生物緩慢增殖(影響計(jì)數(shù));特定成分可能干擾后續(xù)檢測(如PCR)。

適用場景:處理挑戰(zhàn)性樣品的首選:

含抑制劑樣品:食品(防腐劑、酸)、化妝品、水(余氯)、環(huán)境(農(nóng)藥、重金屬)。

含受損/應(yīng)激微生物樣品:經(jīng)加熱、冷凍、輻照、消毒處理后的檢測。

需長時間稀釋操作的樣品。

標(biāo)準(zhǔn)方法強(qiáng)制要求:如沙門氏菌前增菌常用BPW (ISO/GB 4789.4),環(huán)境監(jiān)測常用含中和劑的稀釋液。

編輯:songjiajie2010

 
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