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1. 操作不一致性
加樣誤差：移液器未校準、吸頭松動或加樣速度不均會導致孔間差異。
溫育與洗滌條件：孵育時間、溫度或洗滌次數不一致(如靜置時間不足15秒)直接影響信號穩定性。
人員差異：不同操作者的手法(如拍干力度)可能引入批間變異。
2. 樣本處理問題
樣本不均一：未充分混勻或移液位置不一致導致濃度差異。
溶血/污染：溶血樣本中的血紅蛋白干擾顯色，或樣本中殘留纖維蛋白形成假陽性。
3. 試劑與設備因素
封閉不充分：未阻斷非特異性結合位點，導致背景信號波動。
酶標板損傷：洗板或加樣時劃傷包被表面，影響抗體結合效率。
邊緣效應：外周孔因蒸發或溫度差異導致顯色不均。
4. 環境與質量控制
交叉污染：重復使用封板膜或吸頭導致孔間污染。
儀器校準：酶標儀濾光片設置錯誤或波長選擇不當影響讀數一致性。
優化建議
標準化操作：固定溫育時間(如37℃±1℃)、使用同一批試劑盒。
質控樣本：每板加入陽性/陰性對照，監控批內CV值(目標<10%)。
通過嚴格規范操作流程、優化樣本處理及定期校準設備，可顯著提升ELISA重復性。
注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
