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PCR的基本原理與DNA的體內(nèi)復(fù)制相類似，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火和延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：
模板DNA經(jīng)高溫（95℃左右）加熱一定時間后，使其解離成單鏈，以便它與引物結(jié)合；
②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：
將溫度降至55℃左右時，引物與模板DNA單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合；
③引物的延伸：
再將溫度調(diào)至72℃左右（DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度），DNA模板和引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，沿著磷酸到五碳糖（5'→3'）的方向合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈。這樣經(jīng)變性、退火和延伸重復(fù)若干個循環(huán)后，就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
①模板DNA的變性：
模板DNA經(jīng)高溫（95℃左右）加熱一定時間后，使其解離成單鏈，以便它與引物結(jié)合；
②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：
將溫度降至55℃左右時，引物與模板DNA單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合；
③引物的延伸：
再將溫度調(diào)至72℃左右（DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度），DNA模板和引物結(jié)合物在Taq DNA聚合酶的作用下，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，沿著磷酸到五碳糖（5'→3'）的方向合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈。這樣經(jīng)變性、退火和延伸重復(fù)若干個循環(huán)后，就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
