核心區分原則：需要結合菌落形態、生化反應（關鍵試驗）和藥敏譜進行綜合判斷。沒有單一指標能絕對區分，但某些試驗具有高度指向性。

一、 菌落形態（在常用培養基上）

1、大腸埃希菌：

麥康凱瓊脂： 典型菌落為鮮桃紅色（發酵乳糖產酸），中等大小，濕潤，圓形凸起。

中國藍/伊紅美藍瓊脂： 典型菌落為紫黑色（有時帶金屬光澤），或深紫色。

血瓊脂： 灰白色，濕潤，中等大小菌落，通常為β-溶血（不完全溶血，形成透明環）或γ-溶血（不溶血）。部分菌株可產生粘液樣菌落，但不如肺炎克雷伯菌典型。

2、肺炎克雷伯菌：

麥康凱瓊脂： 菌落呈粉紅色到深紅色（發酵乳糖），但顏色通常不如大腸埃希菌鮮艷。菌落大而粘稠是顯著特征，用接種環挑取時可見明顯的粘絲。

中國藍/伊紅美藍瓊脂： 菌落呈粉紅色到紫色，通常較大、粘稠。

血瓊脂：大、灰白色、非常粘稠、光亮的菌落是其經典特征。用接種環挑取時粘絲現象非常明顯（“拉絲試驗”陽性）。通常不溶血。

3、陰溝腸桿菌：

麥康凱瓊脂： 菌落通常為淡粉色或無色（發酵乳糖能力較弱或不穩定，產酸少），形態多變，可以是濕潤光滑的，也可以稍顯干燥或邊緣不規則。有時菌落中心呈深紅色（鳥眼狀）。

中國藍/伊紅美藍瓊脂： 菌落顏色多變，可能為無色、淡粉或淡紫色。常比大腸和肺克菌落稍扁平。

血瓊脂： 菌落通常呈灰白色、濕潤、中等大小，一般不粘稠，不溶血。

二、 關鍵生化反應（核心區分試驗）

以下是實驗室最常用、區分度最高的幾個生化試驗：

重點解讀：

吲哚(+) + 動力(+) + 賴氨酸(+) ≈ 大腸埃希菌：這是大腸最典型的模式。需注意：有少數動力陰性或賴氨酸陰性的大腸菌株。

吲哚(-) + 動力(-) + 賴氨酸(+) + 尿素酶(+) ≈ 肺炎克雷伯菌：粘稠菌落加上這個生化模式，基本可確定。需注意：有少數動力陽性或尿素酶陰性的肺克菌株。

吲哚(-) + 動力(+) + 賴氨酸(-) + 鳥氨酸(+) ≈ 陰溝腸桿菌：這是陰溝最典型的模式。動力陽性（區別于肺克）和賴氨酸陰性（區別于大腸和肺克）是關鍵。需注意：陰溝的生化特性有時不太穩定。

其他輔助試驗：

山梨醇發酵： 大腸通常陽性（產酸），陰溝通常陰性（不產酸或弱）。肺克可變。

丙二酸鹽利用： 陰溝通常陽性，大腸通常陰性。肺克可變。

ONPG (β-半乳糖苷酶)： 三者通常都陽性（快速發酵乳糖）。

三、 藥敏模式（初步提示，需結合鑒定結果）

1、大腸埃希菌：

社區獲得性菌株可能對氨芐西林、復方新諾明耐藥率高。

產ESBLs（超廣譜β-內酰胺酶） 非常常見，導致對青霉素類、頭孢菌素類（尤其三代如頭孢噻肟、頭孢曲松）耐藥，但通常對碳青霉烯類敏感。

產AmpC酶相對較少見（不如陰溝常見）。

對呋喃妥因通常敏感（常用于單純尿路感染）。

2、肺炎克雷伯菌：

產ESBLs 也非常普遍，耐藥模式同產ESBLs大腸。

產碳青霉烯酶（如KPC） 的風險比大腸和陰溝更高，是CRE（耐碳青霉烯腸桿菌）的主要成員之一。

經典菌株對氨芐西林天然耐藥（因產青霉素酶）。

粘液型菌株有時與高毒力株有關（可導致肝膿腫等）。

3、陰溝腸桿菌：

導致對一代頭孢菌素（頭孢唑林）、二代頭孢菌素（頭孢呋辛）、頭霉素類（頭孢西丁、頭孢替坦）、氨基青霉素（氨芐西林、阿莫西林） 和抗假單胞青霉素（哌拉西林） 耐藥。

在抗生素（尤其三代頭孢）誘導下，AmpC酶產量可顯著增加，導致治療期間出現耐藥（誘導耐藥）。

天然高產染色體介導的AmpC β-內酰胺酶：這是其最重要的特征！

產ESBLs 也較常見。

產碳青霉烯酶的風險也存在。

通常對頭孢吡肟（四代頭孢） 敏感（因其對AmpC酶穩定），但ESBLs或碳青霉烯酶陽性時則耐藥。

對喹諾酮類（環丙沙星） 的耐藥率可能較高。

對復方新諾明通常耐藥。

四、 臨床意義（關聯性提示）

1、大腸埃希菌： 最常見的腸桿菌科病原菌。常引起尿路感染（首要原因）、腹腔感染、膽道感染、血流感染、新生兒腦膜炎等。

2、肺炎克雷伯菌： 常見于醫院感染。引起肺炎（尤其住院患者）、尿路感染、腹腔感染、血流感染、肝膿腫（高毒力株）、傷口感染等。粘液表型與生物膜形成和毒力相關。

3、陰溝腸桿菌： 經典的機會致病菌，常見于醫院感染，尤其是免疫力低下患者、ICU患者、長期使用廣譜抗生素/中心靜脈導管/呼吸機的患者。可引起肺炎、尿路感染、血流感染、傷口感染、腹腔感染等。其固有的AmpC酶和誘導耐藥特性使得治療選擇需要特別謹慎。

總結與鑒別流程（簡化版）：

1、看菌落： 粘稠拉絲 → 優先考慮肺炎克雷伯菌。 鮮桃紅（MAC） → 優先考慮大腸埃希菌。 淡粉/無色（MAC）且不粘稠 → 考慮陰溝腸桿菌等。

2、做關鍵生化：

吲哚(+)： 指向大腸埃希菌 (需結合其他)。

吲哚(-)：

  動力(-)： 指向肺炎克雷伯菌 (需結合尿素酶+，賴氨酸+)。

  動力(+)：

     賴氨酸(+)： 需考慮其他菌（如產氣腸桿菌，但通常吲哚-、VP+、枸櫞酸鹽+，與陰溝不同）。

      賴氨酸(-)： 強烈指向陰溝腸桿菌 (需結合鳥氨酸+、枸櫞酸鹽+等輔助確認)。

3、參考藥敏（輔助）：

對一代頭孢（頭孢唑林）天然耐藥 → 高度提示陰溝腸桿菌 (因其高產AmpC)。

對氨芐西林耐藥但對頭孢唑林敏感 → 不太可能是陰溝，可能是大腸或肺克（產青霉素酶）。

對呋喃妥因敏感 → 支持大腸埃希菌（尤其尿路感染）。

重要提示：

自動化鑒定系統： 現代微生物實驗室主要依靠自動化鑒定系統（如VITEK 2, BD Phoenix, MALDI-TOF MS）進行快速準確鑒定，生化反應和藥敏試驗常整合其中。但了解背后的原理對于解讀結果、發現異常和解決疑難鑒定至關重要。

生物變異： 存在非典型菌株（如動力陰性的陰溝、吲哚陽性的肺克、粘液型大腸等），不能僅憑單一指標判斷。

復合群： 肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌都有各自的復合群（如肺炎克雷伯菌復合群包括肺炎克雷伯菌、產酸克雷伯菌等；陰溝腸桿菌復合群包括陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌等），不同菌種間生化特性有細微差異，自動化系統通常能區分到種水平。

耐藥性復雜： 耐藥機制（ESBLs, AmpC, 碳青霉烯酶）的檢測對指導臨床用藥比單純區分菌種更重要。區分菌種有助于預判潛在的耐藥機制（如陰溝的AmpC）。

掌握菌落形態特征、核心生化反應（吲哚、動力、賴氨酸、鳥氨酸、尿素酶）以及陰溝腸桿菌特有的AmpC酶耐藥模式，是快速準確區分這三種常見革蘭氏陰性桿菌的關鍵。